Ověřování funkčnosti protilátek

Při testování nové protilátky, která vznikla imunizací zvířete známým antigenem postupujeme dle daného algoritmu:

  1. Pokud je komerčně dostupná protilátka vůči antigenu testované protilátky zahrneme ji vždy do paralelního testu vedle protilátky nové.
  2. Testování probíhá standardně na řezu buněčné arraye obsahující tyto stabilizované, komerčně dodávané buněčné linie: (MCF7, Calu3, K562, A549, CEM).
  3. Při používání imunohistochemické reakce na parafinových řezech musíme v některých případech deparafinizované a rehydratované řezy ošetřit tak, aby byl rozvolněn buněčný povrch a daná protilátka mohla specificky nasednout tzv. „antigen retrieval“.
  4. Proto současně s neošetřeným vzorkem standardně provádíme několik typů antigeního retrievalu.
  5. Následně vzorky inkubujeme s primární protilátkou přičemž používáme vysokou koncentraci protilátky (10 mg/ml).
  6. Následuje sekundární značení a detekce.
  7. Po zhodnocení intenzity značení dále optimalizujeme značení tou primární protilátkou, která vyšla při značení pozitivně. Definovaným postupem se snažíme stanovit optimální koncentraci protilátky.
  8. Další testování protilátky probíhá na tkáňových řezech lidských nádorů různého histogenetického původu (karcinom prsu, plic, kolorekta).
  9. Na závěr vytvoříme zkušební protokol o testování protilátky, se zhodnocením pozitivity značení na jednotlivých typech histologického materiálu.
 

 

oponenti intranet