Translační výzkum v molekulární medicíně
Chromozomální a genetická analýza nádorových buněk se stává důležitým faktorem pro prognózu a individualizaci léčby nemocného. Ačkoliv solidní nádory zahrnují v současnosti 90 % všech malignit, znalosti o jejich cytogenetice jsou ve srovnání s hematologickými malignitami minimální. I z těchto důvodů se zaměřujeme na studium genetických alterací v solidních nádorech. Na našich pracovištích se již dnes rutinně z provádí následující vyšetření (v závorce jsou uvedeny používané metodiky: IHC/ICC-imunohisto/cytochemie, WB - Western blot, SB - Southern blot, FACS - průtoková cytometrie, FISH - fluorescenční in situ hybridizace, ELISA - enzymová imunoanalýza, TUNEL - značení apoptotických buněk terminální nukleotidtransferázou):
· DNA syntéza (BrdU inkorporace, 3H-thymidin inkorporace)
· PCNA (WB, ICC, IHC)
· Ki67 (ICC, IHC)
· cykliny (WB, FACS, ICC, IHC)
· ploidita nádorových buněk (FACS)
· analýza buněčného cyklu (FACS, WB, ICC, IHC)
· funkce p53 - kumulace proteinu (WB, ICC, IHC)
· změny v TP53 lokusu - delece, amplifikace (FISH)
· RB (WB, ICC, IHC, FISH)
· c-myc (SB, WB, ICC, IHC, FISH)
· n-myc (WB, ICC, IHC)
· Her2/neu (WB, ICC, IHC, FISH)
· vaskularizace tumoru (morfologie, CD6l)
· procento apoptotických buněk (morfologie, TUNEL.DNA-ladder)
· aktivita telomerázy (PCR)
· stanovení délky telomer (SB)
· exprese a aktivita proteinů buněčného cyklu: CDK l-7, cyklinů A,D,E,B,H, přirozených inhibitorů CDK: p21, p27, p57, p15, p16 (FACS, WB, ICC, IHC, ELISA, substrát fosforylační testy)
· aktivita matrix-metaloproteináz (ICC, IHC, ELISA, enzymové testy)
Sledované parametry jsou korelovány s klinickým průběhem onemocnění a terapeutickou odpovědí nemocných. U části pacientů je/bude dle výsledku in vitro vyšetření individualizována léčba, například:
· Pacientky s pokročilým nádorem prsu a amplifikací Her2/neu jsou zařazeny do studie s aplikací Herceptinu - humanizované monoklonální protilátky proti produktu tohoto genu.
· Pacienti s amplifikací n-myc u neuroblastomu jsou léčeni vysokodávkovanou chemoterapií s transplantací kostní dřeně.
· Kojenci s neuroblastomem IVS (spontánně regredující) bez telomerázové aktivity nejsou léčeni chemoterapií a čeká se na spontánní regresi tumoru.
· Pacienti s Barretovým jícnem (prekanceróza karcinomu jícnu) s průkaznou kumulací p53 jsou indikováni k extirpaci a náhradě jícnu, zbylí nemocní jsou tohoto mutilujícího výkonu ušetřeni.
· Nemocné s nádorem prsu a amplifikací cyklinu Dl jsou plánovány do klinické studie s aplikací syntetických inhibitorů CDK.
· Nemocní s nádory z vazoaktivní tkáně a/nebo mohutnou vaskularizací tumoru jsou indikováni k léčbě interferonem alfa nebo thalidomidem (inhibitory angiogeneze).
· Nemocní, jejichž nádorové buňky mají zkrácené telomery a současně exprimují telomerázovou aktivitu jsou plánováni do studie s inhibitory telomeráz.
1. Mnohočetná léková rezistence
2. Regulace buněčného cyklu
3. Cytogenetika solidních nádorů
4. Prediktivní faktory v klinické onkologii