Vyšetření buněčného DNA obsahu metodami průtokové cytometrie
Normální nedělící se lidské buňky mají 46 chromosomů, což koresponduje s cca 7.10-12 pg DNA na jádro. Během proliferace se obsah DNA zdvojnásobuje. Buňky, které replikují DNA (jsou v S fázi buněčného cyklu) mají obsah DNA nižší ne dvojnásobný. Při malignitách jsou běžné strukturální a/nebo chromosomální aberace. V okamžiku, kdy dojde ke změně v počtu chromosomů můžeme pozorovat DNA aneuploidii. Na druhou stranu pokud ji nepozorujeme, nevylučuje to malignitu anebo přítomnost balancovaných enbo i jiných chromosomálních abnormalit. Ztráta DAN apoptózou nebo při nekróze musí být také brána do úvahy při interpretaci DNA histogramů. Měření obsahu DNA na velkém počtu buněk umožňuje měřit další parametr proliferace a tím je počet buněk v populaci, které se nachází v S fázi buněčného cyklu. Jak ploidita, tak i procentuální hodnocení frakce buněk v S fázi buněčného cyklu může mít prognostický význam u některých typů tumorů.
Obr. 1 Hodnocení buněčného cyklu pomocí průtokové cytometrie
Obr. 2 Hodnocení ploidity pomocí průtokové cytometrie
Hodnotíme změnu vůči „normální“ diploidní populaci. Pro hodnocení používáme DNA index (DI).
Haploidní DI = 0,5
Hypoploidní DI < 1
Diploidní (Euploidní) DI = 1
Hyperploidní DI > 1
Tetraploidní DI = 2 (1,85 – 2,1)
Aneuploidní – DI jiný než 0,5, 1 2
Multiploidní – více populací s různým DI